Проверка набора гипотез

Вмешательство предусматривает неинвазивное воздействие переменными электрическими полями промежуточной частоты 150-200 кГц, называемыми Tumor Treating Fields (TTFields).

Совпадает с исследованием. В исследовании применены неинвазивные переменные электрические поля частотой 200 кГц для клеток глиобластомы, что соответствует указанному диапазону; эксперименты при 150 кГц проведены на клетках рака легкого и поджелудочной железы.

Tumor Treating Fields dually activate STING and AIM2 inflammasomes to induce adjuvant immunity in glioblastoma (Abstract; Results, Figure 1A and accompanying text; Supplemental Figure 4 description.)

Воздействие TTFields вызывает фокальное нарушение ядерной оболочки и образование цитозольных кластеров микроядер в делящихся клетках глиобластомы.

Совпадает с исследованием. Микроскопия выявила фокальные разрывы ядерной оболочки и цитозольные кластеры микроядер в клетках глиобластомы, а эксперименты с рибоциклибом показали зависимость этих изменений от вступления в клеточный цикл; изменения наблюдались также вне митоза.

Tumor Treating Fields dually activate STING and AIM2 inflammasomes to induce adjuvant immunity in glioblastoma (Results, Figure 1A-D; Supplemental Figures 1-7 descriptions.)

Нарушение ядерной оболочки и образование цитозольных кластеров микроядер приводят к привлечению и активации цитозольных сенсоров ДНК cGAS/STING и инфламмасом AIM2/каспаза-1.

Совпадает с исследованием. В исследовании показаны привлечение сенсоров к кластерам микроядер, зависимая от STING воспалительная сигнализация и зависимая от AIM2 активация каспазы-1, что подтверждается экспериментами с подавлением и восстановлением экспрессии соответствующих белков.

Tumor Treating Fields dually activate STING and AIM2 inflammasomes to induce adjuvant immunity in glioblastoma (Results, Figures 1-5; STING and AIM2 depletion and rescue experiments.)

Эта передача сигнала переводит иммуносупрессивное микроокружение опухоли в состояние, допускающее иммунный ответ, с активацией дендритных клеток и адаптивного CD8+ Т-клеточного иммунитета.

Совпадает с исследованием. Эксперименты с кондиционированной средой и сингенной трансплантацией показали активацию дендритных клеток и CD8+ Т-лимфоцитов, иммунную инфильтрацию опухоли и формирование иммунной памяти, зависящие от экспрессии STING/AIM2 опухолевыми клетками. Животным вводили клетки, предварительно обработанные TTFields в культуре.

Tumor Treating Fields dually activate STING and AIM2 inflammasomes to induce adjuvant immunity in glioblastoma (Results, Figures 6-10; Figures 7E-F and 8D-E.)

Предполагаемый механизм, запускаемый воздействием TTFields, увеличивает выживаемость пациентов с глиобластомой, получающих поддерживающую терапию темозоломидом.

В статье не проверено. В группе из 12 пациентов исследованы иммунные изменения после начала TTFields и поддерживающей терапии темозоломидом; причинная связь данного механизма с увеличением выживаемости остается неподтвержденной. Статья ссылается на исследование выживаемости, полный текст которого отсутствует среди представленных материалов.

Tumor Treating Fields dually activate STING and AIM2 inflammasomes to induce adjuvant immunity in glioblastoma (Results, Figures 11-15; Discussion; reference 81.)

Решающий эксперимент проводят на сингенной модели глиобластомы KR158-luc.

Совпадает с исследованием. Клетки KR158 с люциферазной меткой использованы в ортотопической модели глиобластомы, сингенной мышам C57BL/6J, что соответствует указанной модели KR158-luc.

Tumor Treating Fields dually activate STING and AIM2 inflammasomes to induce adjuvant immunity in glioblastoma (Results, Figures 6, 7 and 9; Table 1.)

Решающий эксперимент задан как схема 2×2, в которой сравнение дикого типа с двойным нокаутом STING/AIM2 (DKO) сочетается со сравнением воздействия TTFields с тепловым контролем sham-heat и монотерапией темозоломидом; место монотерапии темозоломидом в указанной схеме 2×2 остается неуточненным.

Условия опыта отличаются. Четыре группы образованы сочетанием двойного подавления экспрессии STING/AIM2 или контрольной последовательности с предварительной обработкой клеток TTFields или отсутствием такой обработки. Примененное подавление экспрессии отличается от заявленного двойного нокаута; тепловой контроль с имитацией воздействия в представленном тексте не подтвержден. Темозоломид отдельно и совместно с TTFields изучали при 300 мкМ в течение 72 часов до трансплантации, в дополнительном эксперименте. Место монотерапии темозоломидом в предложенной схеме 2×2 остается неуточненным.

Tumor Treating Fields dually activate STING and AIM2 inflammasomes to induce adjuvant immunity in glioblastoma (Results, Figure 7A-D; Supplemental Figure 15 description; Methods.)

Биологической мишенью служит потенциалзависимый натриевый канал NaV1.5, каноническое обозначение мишени SCN5A, аберрантно экспрессируемый в клетках рака молочной железы человека.

Совпадает с исследованием. Driffort с соавторами исследовали функциональный канал NaV1.5 в клетках рака молочной железы человека MDA-MB-231, измеряли экспрессию SCN5A и подавляли её с помощью направленной на этот ген shRNA.

Ranolazine inhibits NaV1.5-mediated breast cancer cell invasiveness and lung colonization (Findings; Figures 1 and 2A-B.)

Для вмешательства используют ранолазин, описанный как одобренный препарат фазы 4, в концентрации 50 мкМ in vitro и в дозе 50 мг/кг/сут in vivo.

Условия опыта отличаются. В исследовании применяли ранолазин в концентрации 50 мкМ в клеточной культуре и вводили мышам внутрибрюшинно по 50 мг/кг пять дней в неделю, что отличается от ежедневного введения. Указано одобрение препарата для лечения хронической стенокардии; обозначение фазы 4 в статье отсутствует.

Ranolazine inhibits NaV1.5-mediated breast cancer cell invasiveness and lung colonization (Findings, ranolazine pharmacology and animal experiment; Figures 1, 2E-G and 3A.)

Ранолазин селективно ингибирует персистирующий натриевый ток NaV1.5, за счёт чего устраняет патологическую деполяризацию мембраны и подавляет протеолитическую деградацию матрикса.

В статье не проверено. Ранолазин подавлял натриевые токи и снижал локальный протеолиз матрикса, а результаты исследования инвазии указывали на зависимость эффекта от NaV1.5. Электрофизиологические измерения характеризовали пиковые токи и параметры активации и инактивации; последовательность от селективного подавления персистирующего тока через устранение патологической деполяризации к снижению протеолиза остаётся неподтверждённой.

Ranolazine inhibits NaV1.5-mediated breast cancer cell invasiveness and lung colonization (Findings; Figure 1A-C and Figure 2E-G.)

Предполагается, что применение ранолазина снижает метастатическую колонизацию лёгких без кардиотоксичности.

В статье не проверено. Ранолазин снижал биолюминесцентный сигнал в лёгких на 77 ± 8 % относительно контроля, что свидетельствует об уменьшении опухолевой нагрузки. Сходная динамика массы тела и описание отсутствия явной токсичности характеризуют общую переносимость; отсутствие кардиотоксичности требует специальных измерений, результаты которых в статье отсутствуют.

Ranolazine inhibits NaV1.5-mediated breast cancer cell invasiveness and lung colonization (Findings, lung colonization results; Figure 3B-E; concluding discussion.)

Решающий эксперимент проводят на мышах NMRI nude с ортотопическими ксенографтами MDA-MB-231.

Условия опыта отличаются. В исследовании ранолазина клетки MDA-MB-231-Luc вводили мышам NMRI nude в хвостовую вену, поэтому модель отличалась от ортотопического ксенографта. Три группы включали 18, 12 и 8 мышей, всего 38. Nelson с соавторами отдельно исследовали ортотопические опухоли MDA-MB-231 у мышей Rag2−/− Il2rg−/−.

Ranolazine inhibits NaV1.5-mediated breast cancer cell invasiveness and lung colonization (Findings, animal experiment; Figure 3A-E.)

Решающее сравнение включает четыре группы: контроль, ранолазин, короткая шпилечная РНК (shRNA), направленная на SCN5A, и сочетание shRNA, направленной на SCN5A, с ранолазином.

Условия опыта отличаются. В опыте на животных сравнивали контрольные клетки, клетки с подавленной экспрессией SCN5A и контрольные клетки при введении ранолазина; группа сочетанного воздействия отсутствовала. Сочетание подавления SCN5A с ранолазином исследовали в клеточной культуре, где препарат дополнительно не снижал инвазию после подавления NaV1.5.

Ranolazine inhibits NaV1.5-mediated breast cancer cell invasiveness and lung colonization (Figure 2E; Findings, animal experiment; Figure 3A-C.)

Эксперимент предусматривает контроль митохондриального β-окисления, при этом способ контроля не уточняется.

В статье не проверено. В представленных исследованиях отсутствует описание контроля митохондриального β-окисления в предложенном опыте с ранолазином. Отдельная работа посвящена гликолизу и митохондриальному дыханию при других воздействиях, поэтому её результаты не подтверждают выполнение указанного контроля β-окисления.

Эксперимент предусматривает электрокардиографический мониторинг интервала QT.

В статье не проверено. В представленных исследованиях отсутствуют сведения об электрокардиографическом мониторинге интервала QT в предложенном эксперименте на модели рака молочной железы.